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    人膜間皮細胞使用前要做好哪些工作

    更新時間:2022-07-15  |  點擊率:2898
      間皮細胞就是構成間皮的細胞,間皮是由一層細胞組成的,胸膜,腹膜和器官相接的面上都有間皮細胞。間皮的作用是起到潤滑作用,使身體內的器官與器官、器官與胸膜或與腹膜之間能得到良好的保護,不會因為互相磨損受傷。間皮的潤滑和保護作用就是靠間皮細胞所分泌的細胞外基質、玻尿酸類物質做到的,所以間皮細胞就是身體內的正常細胞。
      人膜間皮細胞使用前要做好哪些工作:
      1)凍存人膜間皮細胞的復蘇:
      將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
      2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
      對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
      1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
      2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
      3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
      3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
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